GET到这些点，才能选对qPCR仪

    上次有读者给小编留言，说自己的实验室想买一台qPCR仪，由于价格不菲，就怕买错了对以后的实验和经费都带来麻烦。这里小编要说一句，好的产品越用越顺心，差的产品越用越糟心。那么今天小编就和大家介绍一下一台出色的qPCR仪需要具备哪些特点呢。

    无论是选择国产还是进口的qPCR仪，首先要从仪器光学检测的技术方案来着手，因为这是qPCR 仪的核心技术，它决定了实验的准确性、可靠性和重复性。

    目前来看，顶部检测CCD技术是定量PCR仪的蕞佳技术方案。国内顶尖qPCR仪和国外主流qPCR仪都采用这种技术，比如美国Thermofisher的Q5/7500，ROCHE的LC480/96，BIORAD的CFX96，以及德国JENA的qTOWER，国内有朗基的Q1000/Q2000系列产品。这种顶部检测技术采用相机原理，直接从PCR管的上方对样品进行实时检测，采光面平行性好，采光面积大，因此小体积反应液都能放心使用（如图1）。

    众所周知，采用顶部检测技术的 qPCR仪所需要的反应体积只需5-10ul即可，（而其他检测方案的qPCR仪至少需要20ul以上），从而很大程度地降低了实验成本。实验达人们蕞清楚qPCR试剂有多贵了，能省一半的试剂就是省下大把的银子啊。

图1  10ul，2倍稀释4个重复

在Q2000上获得的结果

    这里小编要告诉你一个获得蕞佳结果的诀窍——就是改变习惯，使用白管。因为不透明的白管能屏蔽背景噪音，即使样品井有点脏都没有关系。另外，白管还能减少光的折射损失，信噪比和灵敏度更高，因此可获得比透明管更佳的实验效果。顶部检测CCD方案绝配白管，可实现1+1>2的优势。

图2  qPCR专用0.1白管

     另外，0.1ml管由于光程比0.2ml管更短，因而荧光信号更稳定，灵敏度更高（可点击查看：干货 | 为什么qPCR高手都爱用0.1ml管？）。国内PCR仪朗基科仪就是采用SSLP短光程静态荧光CCD成像技术，巧妙地将顶部检测的光程缩小到100mm（而罗氏LC480的光程达到800mm），既可使用白管，又适用0.1ml管。这项创新技术使得朗基Q2000型96孔荧光定量PCR仪的体积更是做到了进口同类产品的一半甚至更小，大大节约了实验室空间。

图3   朗基Q1000 & Q2000荧光定量PCR仪

    无论是普通pcr仪还是荧光定量pcr仪，升降温速率都决定了实验所需的时间，当然是越快越好咯。能快速达到目标温度，从而缩短实验时间和提高工作效率肯定是一台优秀的qPCR仪应具备的品质。而对于PCR仪的变温速率来说，每秒增加1度都是半导体技术的一次飞跃。

    仪器的通量，包括孔数和通道数。目前市场上有8孔、16孔、48孔、96孔，还有384孔，通道数有二通道、四通道、五通道和六通道可以选择。那我们应该怎么选呢？！

    买产品并不只为当下需要，更多的要考虑未来，当然是孔数越多越好，通道数越多越好。无论是科学研究还是疾病诊断，都会越来越多地使用高通量荧光定量PCR仪。需要注意的是，有些进口厂家的仪器只对自家生产的多通道染料开放，所以有较大的局限性，选择时需谨慎。