小朗课堂 前两天，小朗在与某实验室研究员交流时了解到这么一个情况，他们在qPCR实验时使用透明管，得到的实验结果荧光信号值比较低，曲线被压得很低，坐标轴也不太能自适应曲线，显示如下图。 而正常情况如下图，纵坐标的范围是可以随着曲线最大荧光信号值而变化的，并可获得一条漂亮的S曲线。 明白了这个情况后，小朗为其推荐了白管，更换成白管后，问题就迎刃而解了。 那么，问题来了， 为何做qPCR实验时一定要用白管呢？ 荧光信号值与哪些因素有关呢？ 我们一起来学习一下吧～ PCR管/板常见的有白色和透明两种。在传统PCR实验中，两者在使用效果上没有太大差异，相比较透明管更为方便，因为实验者更容易看清楚试剂加上与否。但在荧光定量PCR实验中，白管的优势就凸显出来了。 qPCR实验的核心数据是Ct值，而荧光信号是Ct值计算的数据来源，所以管内的荧光能否完好地传递至顶部的检测器是至关重要的。 如下图是三种不同透明度的管子，因为透明管四周均是透明的，对于底部试剂激发出来的荧光会散向四面八方，管内的荧光信号只有少量能到达管顶部，最终只有少量信号进入检测器，且管间荧光信号不一致。 图1 白管和透明管内部荧光信号路线图 然而，如图1所示，与其他管材相比，白管管壁不透明，几乎没有信号丢失，且隔绝了样品台污染的荧光信号干扰，减少了相同样本孔间差异。 图2 白管和透明管检测信号对比图 从图2中可以看出，同样试剂量的情况下，到达检测器的信号强度，使用白管明显高于透明管。因此相比于透明管，使用白管可明显提高检测器检测到的信号强度，提高qPCR数据的灵敏度。 正因为白管有着高灵敏度的特性，使用白管可以采用小体积反应，从而可减少实验试剂量，大大节省成本～ 图3 白管扩增结果展示图 国际一线品牌也同样证实白管更适合实时荧光定量实验的结论。 赛默飞 如上图，qPCR使用透明和白色耗材的结果比较： （A）与透明孔相比，白色孔Ct值更低（灵敏度更高）。 （B）白色孔在技术重复中也表现出更高的一致性。 在设置实时PCR或qPCR的反应时，与透明耗材相比，我们更推荐使用白色耗材，以实现灵敏和准确的荧光检测。 ——赛默飞生命科学 Jena Sarstedt Eppendorf 那么荧光定量PCR仪需要采用 什么技术才能满足使用白管呢? 我们来看一下 国际主流品牌的定量PCR仪产品， 一探究竟吧～ 首先我们来看一下赛默飞的高端系列Q5和Q7，他们用的是CCD顶部检测的技术方案，再来看一下罗氏的旗舰产品LG480，我们可以看到，他们用的也是CCD顶部检测技术。 朗基是国内第一家全部采用顶部CCD检测技术的定量PCR仪厂家。 朗基奥金系列荧光定量PCR系统 顶部CCD检测技术光学部件固定，稳定性好，故障率低，对荧光信号的接收和处理能力强，是定量PCR仪检测技术的大势所趋。 顶部CCD检测技术 此外，同样是白管，我们实验证明白管的质量高低也会影响荧光信号值的大小。如下图： 结果表明，相较于其他品牌白色管和透明管的扩增曲线，朗基标配的白色管的荧光信号值更强，曲线重合度更好。 综上所述， 在进行qPCR实验时， 使用白管和顶部检测技术的qPCR仪， 可获得更佳实验结果。 朗基奥金系列荧光定量PCR仪 采用顶部CCD检测技术， 配套的管材都是白管， 也可单独采购白管， 欢迎选购朗基产品， 联系我们哦～
